免疫分析中常用封闭剂介绍及选择-技术文章

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免疫分析中常用封闭剂介绍及选择

在免疫学实验中，通常使用封闭剂来减少非特异性结合。常用的封闭剂有脱脂奶粉，BSA，血清以及 Fab 片段单链二抗等。根据不同的平台选择相应的封闭剂。

脱脂奶粉

作用原理：脱脂奶粉含有多种蛋白，可以封闭未吸附蛋白的固相载体（WB 膜、ELISA 板等）位点，减少抗体与之结合的概率，避免非特异性结合带来的高背景。

优点：价格便宜，因含多种不同分子量的蛋白，故封闭起来更全面。

缺点：成分复杂，适用范围窄。不适用于生物素和碱性磷酸酶标记的抗体系统。且封闭后的载体不易长期保存，因此在试剂盒的生产中较少应用。

牛血清白蛋白BSA

作用原理：同脱脂奶粉，封闭未吸附蛋白的固相载体位点。

优点：成分单一，适用于 ELISA 实验，生物素、碱性磷酸酶系统的免疫学检测实验或者其他对特异性要求较高的实验。

缺点：大部分 BSA 中有少量的抗体残留，会导致抗原/抗体之间的交叉反应，造成一定背景。

动物血清

作用原理：

1、待检样本会有些与蛋白非特异性结合的物质，从而导致背景过高，因此可以用血清封闭掉这部分非特异性的结合，从这点看，血清和 BSA 没有明显区别；

2、待检样本中可能会有 Fc 受体，可以和抗体恒定区结合，而封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本 Fc 受体之间结合。BSA 则无法封闭 Fc 受体。

优点：因为血清可以封闭 Fc 受体及减少抗体间的非特异性结合，故在免疫组化、免疫荧光实验中有广泛应用。

缺点：某些封闭血清中可能含有叠氮钠，因此不适用于 HRP 酶标的检测体系。

Fab 片段单链二抗

作用原理：由于二价的抗体（全 IgG 或 F（ab’）2 片段）有两个结合位点，不能用来封闭。而 Fab 片段单链二抗只有一个结合位点，因此可完全封闭免疫球蛋白。

应用：在 IHC 或 IF 双标/多标实验中，封闭样本表面的免疫球蛋白，封闭组织切片或细胞表面的内源性免疫球蛋白，并可解决两个一抗来自同一种属的麻烦。

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